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產(chǎn)品中心產(chǎn)品介紹
HELA人宮頸癌癌細(xì)胞/STR鑒定
細(xì)胞介紹
角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 有報(bào)告稱MS751細(xì)胞含有人乳頭狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。據(jù)報(bào)道,p53表達(dá)水平低,pRB(成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤抑制因子)表達(dá)水平正常。
細(xì)胞特性
1) 來源:宮頸腺癌
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完quan培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完quan培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
HELA人宮頸癌癌細(xì)胞/STR鑒定
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備MEM(推薦iCell-0012)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)yi蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完quan培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
下面T25瓶為例;
1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù):
1、原代細(xì)胞服務(wù)
?。?)各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源;
?。?)多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源;
(3)原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等;
?。?)原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù);
2、細(xì)胞株/系服務(wù)
(1)細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書;
?。?)細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo);
?。?)細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等;
3、iPS細(xì)胞
(1)iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在);
?。?)iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存;
?。?)iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí);
?。?)新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評估;
相關(guān)產(chǎn)品
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