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產(chǎn)品中心產(chǎn)品介紹
Bv2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞/STR鑒定
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞來源于德國DSMZ(German collection of microorganisms and cell cultures),源于C57BL/6小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞,表達(dá)核v-myc、染色體v-raf癌基因,表面表達(dá)envgp70抗原,在形態(tài)學(xué)、表型及功能上有吞噬細(xì)胞的特征。
細(xì)胞特性
1) 來源:小鼠腦
2) 形態(tài):上皮細(xì)胞樣 松散貼壁,懸浮和貼壁細(xì)胞混合生長
3) 含量:>1x10^6 細(xì)胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)半貼細(xì)胞和貼壁不牢(懸?。┘?xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,若細(xì)胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用完quan培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細(xì)胞生長70%-90%對細(xì)胞進(jìn)行傳代,傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完quan培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
Bv2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞/STR鑒定
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 (推薦:iCell-0001) 87%
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%
GlutaMAX-1谷an酰胺 (推薦:iCell-0900 ) 1%
HEPES 1M Buffer solution (推薦:iCell-01200) 1%
P/S青mei素-鏈mei素 1%.
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二. 細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完quan培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,傳代可以參考以下方法:
1. 收集:將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2. 加入0.25%(w / v)yi蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完quan培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3) 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗使用。
下面T25瓶為例;
1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹:
1、原代細(xì)胞服務(wù):
?。?)各類模式哺乳動物的多種原代細(xì)胞資源
(2)多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
?。?)原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
?。?)原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗外包服務(wù)
2、細(xì)胞系服務(wù):
?。?)細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書
?。?)細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)
?。?)細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等
3、iPS細(xì)胞服務(wù):
(1)iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層)
?。?)iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
(4)iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
?。?)新藥及實(shí)驗儀器上市前評估
4、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等
相關(guān)產(chǎn)品
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